1、切片

2、染色

3、白光拍照

4、结果分析
 

番红固绿染色原理
 

番红固绿染色原理是一种组织学染色方法，常用于对组织切片中胶原纤维和肌纤维进行染色。该方法的原理是：组织切片首先经过甲醛等固定剂固定，然后使用番红染色，番红可染色蛋白质和胶原纤维，使它们变为粉红色。接下来再用酸性绿染色剂染色，酸性绿主要染色肌肉纤维，使它们呈绿色。经过两种染色后，胶原纤维和肌肉纤维就可以清晰地区分出来，呈现出不同的颜色，使组织结构更加明显。

番红固绿染色实验步骤
 

1、脱蜡

1) 70 ℃烤片30 min；

2) 二甲苯（I）中脱蜡10 min；

3) 二甲苯（II）中脱蜡10 min；

4) 100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

5) 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；
 

2、水化

1) 95%乙醇中水化5 min；

2) 85%乙醇中水化5 min；

3) 75%乙醇中水化5 min；

4) 蒸馏水中水化待用；
 

3、染色

1) 番红染色1-2 h；

2) 流水稍洗；

3) 固绿染色1min 左右；
 

4、脱水

1) 无水乙醇脱水5 min；

2) 无水乙醇脱水5 min；
 

5、透明

1) 二甲苯（I）透明5 min；

2) 二甲苯（II）再次透明5 min；
 

6、封片

在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶，盖上盖玻片封固。显微镜下观察拍照。

 

尼氏染色实验操作步骤：

1、新鲜组织固定于10%中性formalin溶液48h后，常规脱水包埋；

2、切片厚6-8μm，常规脱蜡至水；

3、蒸馏水冲洗；

4、切片入Toluidine blue Stain，将染色缸置于恒温箱50-60°C侵染25-50min；

5、蒸馏水稍冲洗；

6、入70%乙醇冲洗；

7、95%乙醇迅速分化。提醒：分化不易控制，如果分化失败，可重复步骤4；

8、无水乙醇迅速脱水；

9、二甲苯透明，中性树胶封固；

10、显微镜下观察、拍照。

 

PAS染色实验操作步骤：

1、组织石蜡包埋切片后脱蜡至水，蒸馏水洗2min（提醒：细胞爬片4%多巨甲醛固定后水洗）；

2、滴加过典酸溶液，氧化5min；

3、蒸馏水洗10min；

4、滴加Schiff试剂，侵染10-20min；

5、倾去Schiff 试剂，流水冲洗10min；

6、滴加苏木素染色液，染核1-2min；

7、流水冲洗5min；

8、酸性乙醇分化液分化；

9、Scott反蓝水洗3min；

10、常规透明、封片。